裸藻源β-1,3-葡聚糖是被广泛认可的高效免疫调节剂,它可以提升动物机体免疫力,在人和动物中都有很好的推广和应用,研究成果也在不断推陈出新。2022年底在国际知名兽医杂志Open Veterinary Journal发表了一篇其在猪上的研究成果,题目和作者见图1。题目简单地说明了β-葡聚糖对非洲猪瘟病毒的影响,从文中材料与方法可知其葡聚糖为线性裸藻源β-1,3-葡聚糖。本篇译文将挑选几项重点研究结果,以飨读者。

图1 β-葡聚糖的免疫效果研究发表文章题目截图

  01目的

  在这项研究中,作者以猪肺泡巨噬细胞(PAM)模型研究裸藻源β-1,3-葡聚糖对PAM活力的作用效果。

  02材料与方法

  为评估裸藻源β-1,3-葡聚糖对猪肺泡巨噬细胞的潜在影响, 本研究采用MTT比色法评估裸藻源β-1,3-葡聚糖对免疫细胞增殖的影响。

  收集猪肺泡巨噬细胞,通过血细胞计数器计数,使用培养基对原代肺泡巨噬细胞进行稀释,使细胞浓度为106个/ml。

  将该细胞悬液用100μl移液器均匀分配到96孔微量滴定板中,并在5%CO2中孵育24小时,培养温度为37°C。

  用0μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖(对照组)、30μg/ml 裸藻源β-1,3-葡聚糖和50μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖预处理肺泡巨噬细胞2小时, 然后使用103HAD50/ml的越南非洲猪瘟病毒(ASFV)HN02毒株攻毒。

  在5%CO2、37°C条件下孵育24、48、72、96和120小时,使用MTT试剂盒测定细胞增殖结果,通过实时荧光定量PCR进一步检测裸藻源β-1,3-葡聚糖对越南分离的田间ASFV毒株的潜在影响。

  使用夹心酶联免疫吸附测定法检测裸藻源β-1,3-葡聚糖诱导的干扰素(IFN)-α和白细胞介素(IL)-6的浓度。

  03结果与讨论

  3.1裸藻源β-1,3-葡聚糖能促进猪肺泡巨噬细胞的活力

  用30和50μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖预处理猪肺泡巨噬细胞2小时,对照组未加入裸藻源β-1,3-葡聚糖处理,然后使用103HAD50/ml的越南非洲猪瘟病毒(ASFV)HN02毒株攻毒,在5%CO2 在37°C条件下孵育24、48、72、96和120小时,用MTT试剂盒测定细胞增殖,结果如图2所示。

图2 MTT比色法测定β-1,3-葡聚糖对PAM细胞活力的影响

图表来源:Open Veterinary Journal,2022

  结果表明,与对照组相比,30或50μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖处理组能够以剂量依赖性方式提高细胞存活率,并且这些效果一直持续到120小时。

  3.2裸藻源β-1,3-葡聚糖对猪肺泡巨噬细胞有免疫增强作用

  使用30μg/ml和50μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖预处理 PAM 2小时后,暴露于103HAD50/ml ASFV 持续 12、24小时。

  收集上清液,然后对ASFV的DNA p72基因进行实时PCR扩增,检测裸藻源β-1,3-葡聚糖处理的PAM中病毒DNA的拷贝数,结果如图3所示。

  与对照组相比,使用裸藻源β-1,3-葡聚糖处理的PAM感染12小时后的病毒滴度显着降低。

图3 裸藻源β-1,3-葡聚糖对PAM抗病毒活性的影响

图表来源:Open Veterinary Journal,2022

  3.3高剂量的裸藻源β-1,3-葡聚糖显着增强了病毒感染后PAM中IFN-α和IL-6的产生

  用30μg/ml和50μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖预处理PAM 2小时并设立对照组,然后暴露于103HAD50/ml ASFV病毒条件下,持续12小时(A、C)和24小时(B、D)产生的细胞因子IFN-α和IL-6如图4。

图4 裸藻源β-1,3-葡聚糖处理PAM后感染ASFV产生细胞因子的浓度对比

备注:

A:12小时IFNα浓度(pg/mL)

B:24小时IFNα浓度(pg/mL)

C:12小时IL-6浓度(pg/mL)

D:24小时IL-6浓度(pg/mL)

图表来源:Open Veterinary Journal,2022

  与对照组相比,裸藻源β-1,3-葡聚糖(30μg/ml和50 μg/ml)两个处理组在12h时IFN-α和IL-6的产生均显着增加,并持续到24h。

  高剂量的裸藻源β-1,3-葡聚糖显着增强了感染后PAM中IFN-α和IL-6的产生。

  04结论

  本研究结果揭示了裸藻源β-1,3-葡聚糖对ASFV的影响,其作用机制可能与细胞免疫反应有关,且对裸藻源β-1,3-葡聚糖存在剂量依赖作用。

  此外,研究还表明,裸藻源β-1,3-葡聚糖可以显著提升宿主免疫力。